BUNSEN小课堂:实验室酶标板的使用注意事项
根据不同的分类标准,酶标板有着不同的分类。
一、根据孔数,可分为96孔、48孔,其中96孔是现在常用的,因为酶标板就是配合酶标仪用,现在的酶标仪做出来的最多的是96孔,所以客户在购买时也是要96孔板,厂家也为了适应市场基本上做出来的就是96孔的。
二、根据其底部的不同,又分为平底的,U型底、V型底。平底的折射率低,适于在酶标仪检测;U型底的酶标板折射率较高,方便加样、吸样、混匀等操作,可以不用放在酶标仪上,直接通过目测观察颜色变化情况,从而判定有无相应的免疫反应。V底的酶标板可以精确的吸取样品。
三、根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同,又分为高结合力,中结合力和氨基化的。
1) 高结合力
此种酶标板,表面经处理后,其蛋白结合能力大大增强,可达300~400ng IgG/cm2,主要结合的蛋白分子量>10kD。使用该类酶标板可提高敏感性,并可相对减少包被蛋白的浓度和用量,不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后,以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位,需使用蛋白作为封闭剂。
2) 中结合力
此类酶标板经表面疏水键被动与蛋白结合,适合作为分子量>20kD的大分子蛋白的固相载体,其蛋白结合能力为200~300ng IgG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性,适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体,可降低潜在的非特异性交叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。
四、另外根据颜色又分为透明、黑色、白色。
透明的是常用的,用于最一般的酶联免疫实验。相对于透明的的板子,还有用于发光检测用的不透明的板子,一般有黑色和白色两种。黑色的酶标板自身会有光吸收,所以它的信号相对于白色的板子要低很多,因此一般用于检测较强的光,如荧光检测。而白色的酶标板就用于较弱的光检测,常用于一般的化学发光。另外黑色的酶标板还可以消弱非特异反应带来的问题。有些客户会问,用一般的酶标板可不可以进行发光检测,回答是不可以的,因为一般从化学发光反应中发射出的光是各向同性的,也就是说各个方向上同等发射出来的。如果用透明的板子,光不仅会从垂直方向发散,还从水平方向发散出来。很容易的就会通过各个孔之间的间隙和孔壁。这样的话,光较强时相邻孔之间的影响就会很大,因此不能用透明的酶标板来进行化学发光实验。
五、一般酶标板大多是可以拆卸的,也就是单条可以拆下来,也有固定的板子。单条可拆的的板子其实可以省下许多钱,因为这样的话,当你想用新的酶标板时,可以将酶标板条拆下来,买些酶标板条就可以了,只是要考虑要配相同的型号即可。另外,可拆的酶标板可以用来做体外检测,方便拆卸。
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